小鼠基因操纵核心

＊小鼠基因操纵核心现已开放。请审阅我们的新COVID-19标准操作规程在预订或到达中心之前。

我们的使命

基因操纵核心的任务是利用最新的基因组编辑技术，为波士顿儿童医院的研究人员提供方便、高效、经济和质量可控的基因改变小鼠模型。

几十年来，转基因和基因靶向模型已经被用于产生小鼠模型，在我们继续提供这项服务的同时，CRISPR/Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Regions/ CRISPR associated protein)技术代表了一种更强大、更精确的基因编辑小鼠工具，已成为基因编辑的核心服务选择。

CRISPR/Cas9利用靶向特异性引导RNA、Cas9蛋白和/或通过微量注射引入到单细胞胚胎的供体模板。CRISPR/Cas9介导的基因组编辑依赖于靶序列特异性引导RNA和Cas9核酸酶诱导的双链断裂(double strand break, DSB)的联合作用。细胞修复机制通过两种途径修复DSB: 1)非同源端连接(non-homologous end joining, NHEJ)和2)同源定向修复(homology directed repair, HDR)。NHEJ是一种易出错的高效机制，它主动修复DSB，并在此过程中引入核苷酸的插入或缺失(InDel)，往往导致过早的终止密码子，导致基因功能的丧失，从而产生基因敲除(gene knockout, KO)。HDR是一种效率较低但更精确的修复机制，通过在同源臂两侧提供具有特定变化的单链或双链DNA供体模板，用于引入精确的修饰。

我们如何帮助你的研究

基因操纵核心从2015年底开始利用这一单步奠基者代技术产生基因敲除和敲入、条件等位基因、报告基因插入、Cre驱动和多位点KO。现在几乎所有由核心执行的基因靶向都是基于CRISPR/Cas9的。

该中心还作为低温保存小鼠品系的内部仓库，以胚胎和/或精子的形式保存有价值的小鼠品系。超低温保存服务节省了空间和成本的活菌落和防止意外损失的宝贵品种。

该核心还提供复杂小鼠模型生成的资源和综合知识;基因分型奠基系、育种策略等。核心是在评估新的基因操作技术、它们的有效性和需求、成本和局限性方面保持警惕。服务费用的成本效益是通过对其他朗伍德/哈佛核心设施提供的服务费用的年度评估确定的，费用会相应地调整。此外，我们还响应用户关于他们需要的支持和服务类型的反馈。CRISPR/Cas9基因组编辑、胚胎干细胞培养和基因修饰、植入前小鼠胚胎的微操作和小鼠存活手术胚胎移植所需的技术最好由一个核心设施完成。这些程序需要有质量控制的试剂，微量注射和小鼠手术需要专门的技能、设备和专用的小鼠菌落。开发和维持执行这些程序能力的成本对大多数研究人员来说是令人望而却步的，尤其是那些不经常生成新小鼠系的研究人员。

将这些技术整合到一个为多个调查人员服务的核心设施中，可以使个别调查人员获得除非由非常昂贵的商业供应商提供，否则他们可能无法获得的专门技术。

小鼠核心采用CRISPR/Cas9技术实现体内基因组编辑服务，生成100多个新颖小鼠模型。

我们是由NIH/NICHD U54 HD090255和NIH RO1 NS38253资助的，并支持IDDRC．